液相色谱柱是高效液相色谱(HPLC)系统的核心部件，其性能直接影响分离效果和实验结果的准确性。色谱柱价格昂贵且易受污染或损坏，因此科学的养护至关重要。以下是液相色谱柱养护的详细指南，涵盖安装、使用、存储及问题处理等关键环节。

　　一、安装前的准备

　　1. 确认色谱柱规格

　　根据样品性质和分离需求选择合适填料(如C18、氰基、氨基等)、粒径(1.7μm~5μm)和孔径的色谱柱。

　　检查柱压耐受范围(通常为40600 bar)，避免超限使用。

　　2. 检查封口与兼容性

　　新柱开封后需确认密封完好，检查柱床是否平整(可通过观察入口端填料有无裂纹或凹陷)。

　　使用前用少量纯甲醇或乙腈浸润填料，防止干燥填料直接接触流动相导致收缩变形。

　　二、流动相的优化与处理

　　1. 流动相的过滤与脱气

　　过滤：所有流动相需经0.22μm滤膜过滤，去除微粒杂质(尤其是缓冲盐析出的颗粒)。

　　脱气：超声脱气20分钟或采用在线脱气机，避免气泡进入柱床导致局部压力不稳或填料冲蚀。

　　2. pH值与溶剂兼容性

　　硅胶基质柱(如C18)适用pH 28，高pH会导致硅胶溶解；聚合物基质柱(如PLRPS)可耐受更广pH范围(112)。

　　避免使用含氯离子的缓冲液(如KCl)，优先选用磷酸盐或醋酸盐缓冲体系。

　　水性流动相中需加入一定比例有机溶剂(如5%10%乙腈)防止填料吸水膨胀。

　　三、样品前处理

　　1. 去除悬浮物与杂质

　　样品需经0.22μm滤膜过滤或离心(10,000 rpm以上)，杜绝固体颗粒堵塞柱头。

　　复杂样品建议萃取净化(如SPE固相萃取)，去除蛋白质、脂类等大分子物质。

　　2. 溶剂匹配与稀释

　　样品溶剂需与流动相兼容，避免直接进样强极性或高粘度溶剂(如原油)。

　　高浓度样品需稀释至线性范围(通常不超过10 mg/mL)，防止过载污染柱床。

　　四、日常使用规范

　　1. 流速与压力控制

　　初始使用时以低流速(如0.20.5 mL/min)平衡柱子，避免突然高压冲击。

　　常规流速不超过柱标称上限(如4.6×250 mm柱流速≤1 mL/min)，超压可能导致填料压缩或破损。

　　2. 梯度洗脱后冲洗

　　完成梯度程序后，需用初始流动相(如高水相)冲洗30分钟，清除缓冲盐残留。

　　长期使用缓冲盐后，需用10%甲醇水溶液冲洗柱床，防止盐析出堵塞。

　　3. 温度控制

　　恒温箱温度波动需小于±2℃，高温可能加速填料老化，低温则影响传质效率。

　　五、存储与保养

　　1. 短期停用(<48小时)

　　保持流动相持续冲洗(如甲醇水混合相)，防止填料干燥开裂。

　　禁用纯水或缓冲液静置，避免微生物滋生或填料吸水膨胀。

　　2. 长期存储(>48小时)

　　硅胶柱：用纯甲醇或乙腈保存，定期更换保存溶剂(每12周)。

　　极性柱(如氨基柱)：储存于甲醇水(50:50)混合液，防止氨基脱水失活。

　　反相柱(如C18)：可用异丙醇替代甲醇，抑制微生物生长。

　　六、常见问题与处理

　　1. 柱压升高

　　原因：填料堵塞、筛板污染或柱头塌陷。

　　处理：反向冲洗(如C18柱用甲醇→水反向冲洗)，更换入口筛板或切除柱头12 cm。

　　2. 峰形变宽或拖尾

　　原因：填料老化、键合相流失或金属离子污染。

　　处理：用0.1 M硝酸冲洗金属污染，老化柱需再生或更换。

　　3. 保留时间漂移

　　原因：固定相流失或流动相组成变化。

　　处理：校准流动相比例，老化柱可尝试高温再生(如60℃甲醇冲洗)。